Titolo Progetto: Valutazione di fattori collegati alla morte programmata autofagica e apoptotica delle cellule neoplastiche nel glioblastoma umano

Soggetto proponente:MIRACCO CLELIA DANIELA ANNA

                                                                                           
Descrizione Progetto: Obiettivi / Finalità

 A. Real time RT-PCR; dopo estrazione dell’RNA da frammenti tumorali congelati in azoto liquido e preparazione del c-DNA, si otterrà una quantificazione relativa dell’mRNA dopo normalizzazione rispetto all’espressione di tre geni di riferimento endogeni. B. Western blot; sarà effettuata per valutare l’espressione delle proteine Lc3, Beclina, Caspasi 3 e 8 e Bcl2 in frammenti congelati in azoto liquido in una serie selezionata di campioni con significativamente diversa espressione proteica su sezioni tissutali di glioblastoma.


Indicazione del Responsabile Progetto

 MIRACCO CLELIA DANIELA ANNA

Il Responsabile del Progetto (programma o fase di esso) garantisce il rispetto delle modalità di espletamento della collaborazione oggetto del contratto stesso, al solo fine di valutare la rispondenza del risultato con quanto richiesto e la sua funzionalità rispetto agli obiettivi prefissati.


Eventuale descrizione COMPLESSIVA Progetto
Obiettivo / Finalità

 In un precedente studio è stato dimostrato che l’espressione del gene autofagico Beclin 1 nel glioblastoma presenta differenze tra paziente e paziente, differenze che ci spingono ad ulteriori studi di correlazione con l’andamento clinico della malattia stimolandoci ad approfondire l’indagine sull’autofagia nel glioblastoma e ad estendere l’analisi anche al gene autofagico Lc3 e ad altri geni più strettamente collegati all’apoptosi, in particolare al gene Bcl2, Caspasi 3 e 8 e ad i loro prodotti proteici. Verrà studiato, inoltre, l’effetto di tali geni nel glioblastoma di ogni singolo paziente visualizzando e quantificando nel tumore la morte programmata delle cellule neoplastiche da essi indotta ed alcuni enzimi, le caspasi, che si attivano a cascata nel determinarla. In una serie di casi in cui disponiamo anche di neoplasia recidivata, verrano ricercate eventuali differenze tra il tumore primario e la recidiva , valutando, pertanto, l’effetto di radio e chemio-terapia su tutti i parametri studiati.

Dovranno essere indicate le fasi/sottofasi e i tempi di realizzazione del progetto (arco di tempo complessivo). Si richiede di prevedere i tempi di realizzazione anche per le fasi del progetto che si estendono oltre l'anno, anche se in modo meno puntuale. Nell'ultima colonna devono essere indicati i risultati che si intende raggiungere per ciascuna fase. Il numero delle fasi deve essere proporzionato alla durata del contratto di collaborazione.



        

Descrizione fasi e sottofasi Progetto

Tempi di realizzazione (n. giorni)

Obiettivi delle singole fasi

1

1. Estrazione RNA da frammenti tumorali congelati in azoto liquido

10

Ottenere l’acido nucleico dal frammento bioptico congelato

2

2. Retrotrascrizione

5

Trasformazione dell’RNA in DNA

3

3. Real time RT-PCR

5

Quantificazione relativa dell’mRNA

4

4. Western blot

10

Valutazione dell’espressione proteica

Durata Progetto [giorni]:   30

Il Proponente


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Il Responsabile Progetto
per accettazione della responsabilità

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